• 您好!歡迎訪(fǎng)問(wèn)徠卡顯微系統(上海)貿易有限公司網(wǎng)站!
    全國服務(wù)咨詢(xún)熱線(xiàn):

    17806260618

    當前位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 精確三維定位,實(shí)現EM成像——掌握精髓

    精確三維定位,實(shí)現EM成像——掌握精髓

    更新時(shí)間:2022-11-29      點(diǎn)擊次數:860

    使用簡(jiǎn)化的Coral Cryo電子斷層掃描工作流程確保成功

    低溫電子斷層掃描(CryoET)是一種成像技術(shù),可以讓研究人員以亞納米分辨率觀(guān)察蛋白質(zhì)和其他大生物分子。了解分子的形狀和結構,包括口袋和裂隙,可以幫助研究人員設計能夠像拼圖一樣附著(zhù)于分子的藥物。低溫ET成像也因此成為了解和治療疾病和失調的重要基礎。

    了解徠卡顯微系統的無(wú)縫冷凍電子斷層掃描流程Coral Cryo如何使用共聚焦超分辨率更精確地定位您的意向結構。利用該工作流程,您可以可靠地快速部署實(shí)驗,實(shí)現更好的可重復性、靈活性,并提高最終結果的準確性。

    冷凍電子斷層掃描(CryoET)

    使用了冷凍電子斷層掃描(Cryo TEM),將在細胞環(huán)境內觀(guān)察生物分子的分辨率提升到了1nm,達到了qian suo wei you的精度。通過(guò)這種方式,可以?xún)H通過(guò)其形狀來(lái)識別單個(gè)蛋白質(zhì),而且無(wú)需任何標記,甚至可以區分不同的構象,幫助深入理解分子社會(huì )學(xué)。

    CryoET成像為理解空間蛋白質(zhì)結構和相互作用提供了一種全新的方法,有助于解讀細胞機制并應用這些見(jiàn)解。例如,它們可能有助于開(kāi)發(fā)多種疾病的治療方法。

    但是,亞納米分辨率的成像存在多種挑戰:它的成本高昂,需要大量的培訓,涉及許多儀器操作,而且大多數情況下,電子顯微鏡(EM)無(wú)法選擇性地顯示目標結構。為確保高成功率,在工作流程的光鏡(LM)階段,需要以盡可能高的分辨率識別和定位EM成像的目標體積。

    徠卡顯微系統的無(wú)縫低溫電子斷層掃描工作流程Coral使用共焦超分辨率進(jìn)行精確定位。該工作流程不僅減少了樣本制備的步驟,還提高了樣本裝載和轉移的成功率,從而提高了On-Grid Lamella/CryoET工作流程的效率。

    目標坐標以開(kāi)放格式提供給后續的FIB研磨和LM-EM關(guān)聯(lián)。因此,您可以實(shí)現更高的工作效率和更好的實(shí)驗可再現性。這可以幫助您加速設施中的方案部署,并提高最終結果的準確性。

    精確的三維體積定位

    STELLARIS 5低溫共聚焦顯微鏡,包括低溫平臺和轉移梭,是Coral Cryo工作流程中精確定位的核心部分。與寬視場(chǎng)儀器相比,共焦顯微鏡的Z分辨率更高,在設計上更適合三維定位。

    通過(guò)在后續的高精度關(guān)聯(lián)中應用超分辨率的數據,STELLARIS 5 Cryo作為一個(gè)獨立的組件,性能優(yōu)于使用集成光鏡進(jìn)行定位的EM解決方案,同時(shí)也釋放了寶貴的EM儀器時(shí)間。

    使用熒光珠在樣本上施加一個(gè)基準標記。通過(guò)確定它們在三維圖像數據中的位置,可以顯著(zhù)提高Z軸上的定位精度。此外,徠卡還開(kāi)發(fā)了一種基于插值的方法,能夠以比系統的實(shí)際光學(xué)分辨率更高的精度找到熒光珠中心(正在申請zhuan li)。

    LAS X Coral Cryo:基于插值的三維定位,使用X和Y方向的Z-堆棧的截面。標記可在所有相關(guān)窗口中交互移動(dòng)。


    安全完成工作流程的各個(gè)階段

    STELLARIS 5 Cryo可結合先進(jìn)的CryoET定位軟件(LAS X Coral Cryo),還可以無(wú)縫集成和轉移到低溫FIB或VCT平臺。傳統的低溫電子斷層掃描的工作流程包含多個(gè)復雜的步驟,特別容易出錯,并經(jīng)常破壞后續重要的成像步驟。人工準備、處理和轉移樣本的步驟不僅麻煩、繁瑣,還可能導致樣本污染或反玻璃化。

    Coral Cryo的工作流程改變了這一點(diǎn)。通過(guò)簡(jiǎn)化工作流程,可以實(shí)現更廣泛的CryoET應用。精簡(jiǎn)的步驟、高靈活性和安全性,可確保樣本的活力、質(zhì)量檢查,實(shí)現精確和可靠的三維定位機制。

    低溫平臺是一個(gè)更穩定的封閉系統,更容易操作,且無(wú)需從平臺上取下冷卻插件。樣本轉移梭的裝載過(guò)程簡(jiǎn)單,可將樣本損失的風(fēng)險降至zui di,并促進(jìn)沿儀器平臺的轉移。

    STELLARIS 5 Cryo可結合先進(jìn)的冷凍電子斷層掃描定位軟件 (LAS X Coral Cryo),并與冷凍FIB或VCT階段的各種無(wú)縫集成和傳輸選件結合使用。

     Clamydomonas TauSense比例尺10µm

    Coral Cryo - 工作原理

    集成解決方案的優(yōu)勢

    如果沒(méi)有準確的目標位置,片狀目標區域的方法通常是一種耗時(shí)的迭代方法。與集成 LM-EM版本相比,使用Coral Cryo工作流程和STELLARIS 5 Cryo共聚焦顯微鏡可以通過(guò)共聚焦技術(shù)提供更高的分辨率,更好的圖像質(zhì)量和更高的Z分辨率。Coral Cryo為精確檢測目標熒光提供了光譜靈活性,我們du te的TauSense技術(shù)

    以消除不需要的自發(fā)熒光,并對目標識別進(jìn)行微調,在進(jìn)入EM階段之前可以預先檢查。

    用TauSense成像工具檢查硅藻。光譜-500-640 nm光譜帶的強度圖像。TauContrast-Look-up-table表示光子的平均到達時(shí)間;短的到達時(shí)間為藍色,長(cháng)的到達時(shí)間由黃色過(guò)渡到紅色。顯示了不同的結構。TauSeparation-T光譜成分被分離,成分1顯示葉綠體的自發(fā)熒光,0.1 ns;成分2顯示純凈的LifeAct-GFP信號,平均到達時(shí)間2.7 ns。樣本由德國TU Dresden,B CUBE的Nicole Poulsen提供。


    靈活性

    Coral Cryo提供兩種不同的工作流程解決方案,為低溫FIB顯微鏡提供高靈活性。通過(guò)我們靈活的工作流程,我們的低溫傳輸系統EMVCT可以連接市場(chǎng)上所有的低溫FIB 解決方案,為您提供Coral Cryo工作流程的所有優(yōu)勢。對于Thermo Scientific Aquilos的用戶(hù),我們提供集成解決方案,通過(guò)將我們的樣本盒與Aquilo低溫FIB 的硬件整合,進(jìn)一步減少工作流程的步驟。

    精簡(jiǎn)的端到端Coral Cryo工作流程提供了明確的步驟、模塊和無(wú)縫的硬件和軟件接口。由于無(wú)縫的硬件和軟件接口,Coral Cryo可以快速部署在您的設施或實(shí)驗室。

    熒光結構的三維定位用于冷凍電子斷層掃描

     

    熒光結構的三維定位用于冷凍電子斷層掃描。薄片轉移到低溫TEM上。由德國Martinsried的Max-Planck生物化學(xué)研究所的Anna Bieber和Cristina Capitanio友情提供;Stem由Florian Wilfling提供。

    通過(guò)超分辨率的低溫共聚焦顯微鏡識別熒光結構。使用樣本周?chē)闹樽幼鳛橄嚓P(guān)標記,可以在低溫FIB-SEM上識別目標結構,并從細胞體積中磨出含有目標結構的薄片。薄片被轉移到低溫TEM上,記錄薄片的傾斜系列。從傾斜系列中可以計算出三維體積,其分辨率可達亞納米級,并為可視化和分析創(chuàng )建一個(gè)渲染圖。

    · A - 共聚焦三維體積的最大強度投影。目標結構(表達Ede1-eGFP的酵母細胞,參與凝集素介導的內吞作用)由一個(gè)箭頭描述出來(lái)。

    · B - FIB研磨后的TEM中的FIB片層,疊加Ede1-eGFP的熒光。

    · C - 片層體積斷層圖的示例性圖像。正方形表示圖像D的位置。

    · D-斷層圖的細節,描繪了相分離的內細胞蛋白沉積。

    比例尺:A - 內部網(wǎng)格方塊的寬度。90μm,條寬:35 µm.B, C, D - 插入物的邊緣長(cháng)度為2微米。

    LNG-non-LNGHeLa細胞標記色:深藍色-Hoechst,細胞核;綠色-MitoTracker Green,線(xiàn)粒體;紅色-Bodipy,脂質(zhì)滴。白色-珠子,反射模式-網(wǎng)格條。細胞由德國海德堡歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗室(EMBL)Mahamid Group的Ievgeniia Zagoriy友情提供。


    徠卡顯微系統(上海)貿易有限公司
    地址:上海市長(cháng)寧區福泉北路518號2座5樓
    郵箱:lmscn.customers@leica-microsystems.com
    傳真:
    關(guān)注我們
    歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
    歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
    了解更多信息
    亚洲成AV 人片在线观看无码,亚洲成亚洲成网,亚洲国产成人一区二区三区,8060yy中文无码视频在线观看